国产琥乙红霉素组分和有关物质的分析
2009-12-10 17:04:42   来源：本站原创   评论：0 点击：

 
 《中国抗生素杂志》 2008年第09期
 
作者单位：中国药品生物制品检定所， 北京100050

【摘要】  目的 考察国产琥乙红霉素原料和制剂的组分和有关物质，为修订中国药典2005年版琥乙红霉素质量标准提供依据。方法 采用美国药典30版收载的hplc法测定6个厂家的红霉素原料、琥乙红霉素原料和制剂共16批样品的组分和有关物质，并采用欧洲药典5.0版收载的方法测定琥乙红霉素样品中游离红霉素的含量。结果 国产红霉素以红霉素a为主组分，含有少量的红霉素b、红霉素c和红霉素e组分，有关物质主要为脱水红霉素a，其它有关物质含量较少。以红霉素为原料合成的琥乙红霉素中的主要有关物质为游离红霉素。结论 建议将中国药典2005版琥乙红霉素有关物质的薄层色谱法修订为高效液相色谱法，便于更好地控制产品质量。

【关键词】  琥乙红霉素； hplc； 组分和有关物质； 游离红霉素

analysis of the erythromycin ethylsuccinate and its related substances

    yang ya?li,  wang chen,  wang min?juan  and  hu chang?qin

    (national institute for the control of pharmaceutical and biological products,  beijing 100050)

    abstract  objective  to investigate the related substances profiles of the domestic erythromycin ethylsuccinate bulk material and preparation, and provide data for the monograph of erythromycin ethylsuccinate in the chinese pharmacopoeia 2005.  method  the ingredient and the related substances of totally 16 batches of erythromycin ethylsuccinate bulk material and preparation of 6 manufacturers were determined using the hplc method of usp 30, and the erythromycin free base were determined using the method of ep 5.0. results  the major ingredient of domestic erythromycin was erythromycin a and there were minor amount of erythromycin b, c and e. the main related substances was anhydro?erythromycin a and the content of other impurities were relatively small. the major related substances of erythromycin ethylsuccinate synthesized by using erythromycin as starting material was erythromycin free base.  conclusion  to ensure better quality control for the products, it is recommended that the tlc method involved in the chinese pharmacopoeia 2005 to determine the related substances of erythromycin ethylsuccinate to be replaced by the hplc method.

    key words  erythromycin ethylsuccinate;  hplc;  related substances;  erythromycin free base

    琥乙红霉素是以红霉素为原料合成的琥珀酸乙酯衍生物，其组分和有关物质与红霉素原料中的组分和有关物质及厂家的生产工艺密切相关。琥乙红霉素质量标准在中国药典2005版［1］、美国药典30版［2］和欧洲药典5.0版［3］均有收载，中国药典2005版系采用薄层色谱法测定有关物质，对琥乙红霉素各组分及有关物质的定性和定量结果均比较差。usp30版和欧洲药典5.0版则采用hplc法进行定量测定。usp30版采用杂质对照品对已知杂质进行定量，控制红霉素a烯醇醚不得超过3.0%，n?去甲基红霉素a不得超过3.0%，任意单个杂质不得超过3.0%；欧洲药典则采用相对保留时间确定各组分及已知杂质，控制任意单个杂质不得超过3.0%，总杂质不得超过5.0%，并对合成工艺和贮藏条件下产生的游离红霉素进行了限度要求。目前国内对琥乙红霉素有关物质的研究较多［4～6］，但大多仅限于对单个游离红霉素的测定或有关物质总量的测定，对琥乙红霉素组分及各有关物质未作系统研究。本文参考usp30版和欧洲药典5.0版的标准，对国内6个厂家的琥乙红霉素原料及其制剂的组分和有关物质及游离红霉素进行了定性和定量测定，为了解国内琥乙红霉素产品质量和修订中国药典2005版标准提供依据。

    1  仪器与试药

    液相色谱仪采用shimadzu高效液相色谱仪(lc?20at泵、spd?m20a检测器、sil?20ac自动进样系统)，shimadzu lc solution色谱工作站。

    红霉素对照品(lot 24200m)、红霉素b对照品(lot g1c080)、红霉素c对照品(lot 24202f3)、n?去甲基红霉素a对照品(lot 24202f2)购自美国药典委员会，叔丁醇、乙腈、甲醇为色谱纯，水为双蒸水。

    2  实验方法

    2.1  溶液的制备

    (1)有关物质测定

    对照品溶液①  取50mg红霉素对照品，精密称定，置25ml容量瓶中，加甲醇12.5ml，振摇使溶解，用水解液［磷酸氢二钾(2到100)，用磷酸调ph为8.0］稀释至刻度，摇匀。

    对照品溶液②  分别取红霉素b对照品和红霉素c对照品各5mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加甲醇25ml，振摇使溶解，加对照品溶液①2.5ml，用水解液稀释至刻度，摇匀。

    系统适用性溶液  取2mg n?去甲基红霉素a对照品，加至20ml对照品溶液②，混匀。

    红霉素a烯醇醚溶液  取红霉素usp对照品10mg，加甲醇2ml溶解，加ph3.5磷酸盐缓冲液20ml，放置30min后使用。

    供试品溶液①  精密称取红霉素约100mg，置50ml容量瓶中，加甲醇至刻度。

    供试品溶液②  精密称取琥乙红霉素约115mg(制剂按标示量计算取相当量细粉)，置50ml容量瓶中，加甲醇25ml，振摇使溶解，加水解液20ml，混匀，在室温放置12h使水解，用水解液稀释至刻度，立即进样。

    (2)游离红霉素测定

    对照品溶液  取红霉素对照品(中国药品生物制品检定所，130307?200215，红霉素a92.3%，红霉素b0.9%，红霉素c1.2%)约16mg，至50ml容量瓶中，加流动相至刻度(立即使用)。

    样品溶液的制备  称取琥乙红霉素约125mg(制剂按标示量计算取相当量细粉)，置25ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，立即进样。

    2.2  试验条件

    (1)有关物质  色谱柱为polymer laboratories 1000a(250mm×4.6mm，8μm)，s/n：8m?rps10?436a?38；流动相为ph8.0缓冲液50ml，加400ml水，加175ml叔丁醇和30ml乙腈，用水稀释至1000ml，混匀；检测波长215nm；柱温70℃；流速1.0ml/min，进样50μl。

    (2)游离红霉素  色谱柱为phenomenex dose: gemin c18 110a(250mm×4.6mm， 5μm)；流动相为含2.0g/l的乙腈∶3.4g/l磷酸二氢钾(35∶65)溶液，用磷酸调ph3.0；检测波长195nm；柱温为室温；进样量20μl。

    3  结果及讨论

    3.1  琥乙红霉素有关物质峰的归属

    通过对照品可以确定红霉素a、红霉素b、红霉素c、n?去甲基红霉素a和红霉素a烯醇醚，并参考欧洲药典以相对于红霉素a保留时间确定了水解物(rrt小于0.3)、n?琥珀酸乙酯红霉素(rrt 1.3)、脱水红霉素a(rrt 1.4)和假红霉素a烯醇醚(rrt 1.5)，琥乙红霉素有关物质的典型色谱图见图1。

    3.2  产品有关物质分析结果

    (1)原料  表1结果显示，国产红霉素以红霉素a为主组分，红霉素b和红霉素c的含量较少，与国外红霉素组分不同，国外药典将红霉素b和红霉素c组分作为活性组分，对其限度较宽，规定红霉素b组分不得超过12%、红霉素c组分不得超过5%。企业②产品中红霉素b含量略高于企业①产品，其脱水红霉素a杂质也相对较高，红霉素e组分两个原料厂家均有，说明不同厂家、不同批次产品，由于菌种不同、发酵工艺和培养条件变化，产品中各组分的含量也不同。企业①琥乙红霉素中脱水红霉素a较其原料红霉素略有增加，提示合成工艺中会引入脱水红霉素a杂质。

    (2)制剂  表2是琥乙红霉素制剂有关物质测定结果。琥乙红霉素制剂中的有关物质主要为脱水红霉素a、红霉素a烯醇醚和未知杂质(rrt 0.77)，各企业产品的有关物质含量不同，企业⑤产品中脱水红霉素a和假红霉素a烯醇醚的含量较高，使有关物质总量(除红霉素b和红霉素c组分外各有关物质之和)较高。企业①琥乙红霉素制剂与琥乙红霉素原料中的脱水红霉素a含量相当，提示制剂工艺中不再产生脱水红霉素a。

    3.3  产品中游离红霉素的测定结果

    测定游离红霉素要求在琥乙红霉素未水解成红霉素的条件下进行测定，故欧洲药典5.0版采用两种色谱系统测定琥乙红霉素有关物质，一是采用聚合柱，将琥乙红霉素水解成红霉素后测定其组分和有关物质，二是采用c18柱系统将琥乙红霉素样品溶解后直接测定游离红霉素。国内文献［5］报道的测定游离红霉素方法中红霉素峰旁有1个较难分开的未知成分峰，影响游离红霉素的准确定量。而欧洲药典5.0版收载的方法分离效果好(图2)。表3显示采用欧洲药典5.0版方法测定琥乙红霉素制剂中游离红霉素的结果，企业①产品原料的游离红霉素含量小于胶囊和片剂，由于游离红霉素易在高温和高湿下产生，提示生产企业在表2  琥乙红霉素制剂有关物质测定结果典型色谱图生产工艺和储存条件上应加以控制。15批样品中企业④的游离红霉素含量超过限度，提示在药品标准中控制游离红霉素含量的必要性。

    4  小结

    国产红霉素由于菌种和发酵工艺与国外产品不同，最后产品以红霉素a为主组分，含有少量的红霉素b、红霉素c和红霉素e组分，有关物质主要为脱水红霉素a，其它有关物质含量较少。以红霉素为原料合成的琥乙红霉素由于生产厂家和工艺不同，所含各组分的量也不同， 通过对各有关物质的定性和定量分

    表3    琥乙红霉素中游离红霉素的测定结果

    剂  型企业和批次游离红霉素(%)原料①?10.62原料①?20.61原料①?30.49胶囊①?42.63胶囊①?52.18胶囊①?61.93片剂①?72.02片剂①?82.25片剂①?92.56原料②?13.65原料②?23.36片剂③  1.67片剂④  6.59片剂⑤  4.22颗粒⑥  2.40

    析，可以判定产品的优劣。同时对产品中游离红霉素的考察，也可以发现不同企业间产品的差异。建议进一步提高中国药典2005版琥乙红霉素质量标准，以更好地控制产品质量。

【参考文献】
  ［1］ 国家药典委员会. 中华人民共和国药典2005年版(二部)［s］. 北京：化学工业出版社，2005：677.

［2］ usp(美国药典)［s］. 30版. 2007，2：2067.

［3］ ep(欧洲药典)［s］. 5.0版. 2004：1521.

［4］ 余建清，雷嘉川，罗顺德，等. 离子抑制色谱法测定琥乙红霉素含量及其有关物质［j］. 中国药物科学杂志，2003，12(1)：41～44.

［5］ 佟志，钟长鸣，王庆全. hplc法测定琥乙红霉素口服制剂中红霉素残留量［j］. 药品评价，2005，2(6)：434～435.

［6］ 陶涛，刘浩. 琥乙红霉素咀嚼片有关物质的检查［j］. 中国药品标准，2002，3(3)：52～55.