产纤维素酶细菌原生质体制备条件初探
2008-02-09 12:42:37   来源：本站原创   评论：0 点击：

的再生，主要原因是液体培养基中虽然在原生质体表面也能形成葡聚糖纤维网状物，但填充这一空隙的细胞壁成分如甘露聚糖、蛋白质、脂质等，不能定位而被稀释在溶液中。同样，原生质体再生的固体培养又可分为两种方式，即单层平板培养和双层平板培养^[7]。实验中采用固体培养的两种方式，结果表明在原生质体制备率基本相同的情况下，采用双层平板培养的原生质体再生率为30.25%，同比单层平板培养的原生质体再生率只有24.71% 。

图7：再生培养方式对原生质体形成率和再生率的影响

Fig7：Effect of the method of regeneration on the production and reformation rate of protoplast

4.结论

本研究从原生质体制备条件的影响因子出发,采用单因子分析方法得到了各单因子的最佳值,即最佳菌龄、酶液浓度、酶解温度、酶解时间、再生培养基及再生培养方式分别为：对数生长中期、5mg/ml、35℃、45min、0.54M 蔗糖和双层培养.为下一步的菌株诱变提供了一定的基础.接下来的研究工作,我们将设计正交实验分析各影响因子,从而获得该菌株原生质体制备的条件最优组合,实现该菌株的原生质体化,为后续的诱变提供基础.以期实现该菌的进一步利用和开发.

主要参考文献：

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[7] 孙剑秋，周东坡. 微生物原生质体技术[J].生物学通报，2002，37（7）：9—11.

The protoplast formation and regeneration of cellulose—decomposing bacteria

Wu Hong Ping¹，Wang Ruiping^2*

（1.College of Environment and Plant Protection, HaiNan University , Dan Zhou, Hai Nan, 571737; 2.Department of Biology, HaiNan Normal University,HaiKou,HaiNan,571158）

Abstract: Using the Cellulose—decomposing bacteria producing JJQ1—3 ,the effects of some factors on the formation and regeneration of protoplasts in JJQ1—3 were studied, including the culture of age, the concentrations of enzyme, digesting time and temperature, the culture of regeneration and the method of regeneration。The best culture age was the Middle of growth ,and the others were 5mg/ml、35 degree、45minute、0.53mol/l cane sugar and double layers culture method。And the rates of formation and regeneration of protoplasts of strain JJQ1—3 were 98.23 %and 23.30 %、98.15% and 25.60 %、98.08% and 22.35%、98.08% and 25.49%、98.00% and 23.86%、98.15% and 30.25 % ,respectively 。

Keywords: Cellulose-decomposing bacteria ；protoplast；formation；regeneration

作者简介：吴红萍（1982-）男，汉族，微生物学硕士研究生 。单位:中国热带农业科学院环境与植物保护研究所

E-mail:whp789@126.com  电话:0898-23306943

通讯作者:王锐萍（1963-）女，汉族，湖北，副教授，主要从事应用微生物研究。

E-mail：wrp@hainnu.edu.cn   电话:0898-65883521