酵母流加培养技术
2009-10-09 19:36:26 来源:本站原创 评论:0 点击:
(一)菌种与培养基
1、 菌种:啤酒酵母( Sacharomyces cerevisiae )。
2、 培养基( g/L )
( NH 4 ) 2 SO 4 12 , K 2 SO 4 2 , Na 2 PO 4 ·1 2H 2 O 6.0 , MgSO 4 1.5 , GaCl 2 0.1 , NH 4 Fe ( SO 4 ) 2 ·1 2H 2 O 0.06 ,葡萄糖 3g ,盐溶液 30mL [mg/L : ZnSO 4 ·7 H 2 O 0.2 , CuSO 4 ·5 H 2 O 0.01] ,含维生素和微量营养物质的溶液 3.0mL [ ( mg/L ):维生素 B 1 0.2 ,烟酸 5.0 ,对氨基苯甲酸 0.3 ,泛酸(盐) 0.5 。维生素 0.006 ,内消旋肌醇 50 ,维生素 B 6 1.0 , pH5.0 。
流加的浓葡萄糖液质量浓度为 25g/100mL , 0.5moL/LNH 3 用于调节发酵液 pH 。注意保持培养基中糖的质量浓度在 0.5g/L 。
a、 种子培养
b、 液体试管培养
自斜面菌种挑取一环酵母菌体,接入装有 10mL12 ° Bx 无菌麦芽汁的液体试管中,摇匀后,置于 30 ℃ 培养箱中培养 24 小时。
c、 三角瓶培养
将上述培养好的液体试管种子接入用 500ml 三角瓶装的灭过菌的 100mL10 ~ 12 ° Bx 的麦芽汁中,在 30 ℃ 下培养 15-20 小时。
(二) 流加培养方法
培养罐中加入已调配好的培养基后,放在灭菌锅中灭菌( 121 ℃ , 20 ~ 30min ), 25g/mL 葡萄糖液和消泡剂分别同时灭菌。培养罐取出后,开通冷却进行冷却,同时开动搅拌器,通入无菌压缩空气以防止产生负压,冷却到发酵温度 30 ℃ ,利用硅橡胶管将 25g/100mL 葡萄糖液贮瓶和 0.1mol/L 氨液贮瓶分别连续蠕动泵和培养罐上的入口。
接种,接种量 10% 。开动蠕动泵流加 25g/mL 葡萄糖液 30ml , 1 小时后取样(约 30mL )分析葡萄糖浓度和菌种量,再流加入 25g/100mL 葡萄糖液 30ml ,依次进行,培养 7 ~ 10 小时。滴加 0.1mol/L 氨液,控制培养液 pH 为 5.0 。通风调节风量和搅拌转速控制溶氧浓度在 10% 左右。
(三) 分析方法
1、 菌体量:干重法
2、 葡萄糖浓度:斐林法
(四) 数据处理
画出培养液中葡萄糖( g/L )、酵母菌体量( g/L )随培养时间的变化曲线,计算出酵母产率。
附:斐林法测还原糖
1、 试剂: ① 斐林试剂
② 0.1%标准葡萄糖溶液
2、 测定步骤:
① 斐林试剂的标定:吸取斐林试剂甲、乙液各5Ml。置于250mL三角瓶中,加入10mL水,并从滴定管中预先加入约24mL0.1%标准葡萄糖溶液(其量控制在后滴定时消耗0.1%标准葡萄糖溶液1mL以内),摇匀,于电炉上加热至沸,立即以4~5秒每滴的速度继续用0.1%标准葡萄糖溶液滴定至蓝色消失,此滴定操作需在1min中内完成,总消耗量为V 0 mL。
②定糖:
预备试验:吸取斐林试剂甲、乙液各 5mL,置于250mL三角瓶中,加入V 1 毫升试样稀释液(含葡萄糖量为 5 ~ 15 毫升)及适量多 .1% 标准葡萄糖溶液,摇匀,以下同标定时操作。总耗糖量为 V 2 毫升。
正式实验:吸取斐林试剂甲、乙液各 5 毫升,置于 250mL 三角瓶中,加入 V 1 毫升试样稀释液和( V 2 - 1)毫升 0.1% 标准葡萄糖溶液,补加 [ ( V 0 +10 ) - ( V 1 +V 2 ) ] 毫升水,摇匀,以下操作同标定时操作,总耗糖量为 V 毫升。
3、 计算
葡萄糖 = ( V 0 -V ) ×C×n×1/V 1 ( g/mL )。
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