hplc法测定泰乐星中的相关物质
2009-12-10 17:06:59   来源：本站原创   评论：0 点击：

作者单位：西安亨通光华制药有限公司， 西安杨陵712100

【摘要】  目的 建立泰乐星中相关物质的测定方法。方法 采用高效液相色谱法，紫外检测器，检测波长290nm；c18不锈钢色谱柱(200mm×4.6mm，5μm)；柱温35℃；流动相为200g/l高氯酸钠∶乙腈(60∶40)并用1mol/l hcl调节ph至2.5；流速1.0ml/min；进样量20μl，峰面积归一化法计算。结果 各相关物质峰保留时间及峰面积的rsd分别为0.65%和2.25%；各峰的分离度均不小于1.5。结论 本法简便、灵敏、专属。

【关键词】  高效液相色谱法； 泰乐星； 相关物质

酒石酸泰乐星为大环内酯类兽用抗生素，用于革兰阳性细菌及支原体等感染的治疗。其主要活性成分为泰乐星a以及泰乐星b、c、d四个组分。兽药典［1］采用高效液相色谱法测定泰乐星的有关组分。方法中测得的四个组分以外的其余峰即为酒石酸泰乐星中的相关物质。本文采用药典规定的方法同时测定样品中的相关物质，方法学考察结果表明，该法简便、灵敏、专属。可有效控制泰乐星的质量。

    1  仪器与试药

    10avp型高效液相色谱仪(岛津公司)配紫外检测器；泰乐星原料药(批号05121386?1，05121389?1，05121389?2)由西安亨通光华制药有限公司提供；高氯酸钠、盐酸为分析纯，乙腈为色谱纯。泰乐星标准品由中国兽药监察所提供。

    2  色谱条件

    紫外检测器，检测波长290nm；色谱柱为c18不锈钢柱(0.20m×4.6mm，5μm)；柱温35℃；流动相为200g/l高氯酸钠∶乙腈(60∶40)并用1mol/l hcl调节ph至2.5；流速1.0ml/min；进样量20μl。

    3  方法与结果

    3.1  溶液配制

    标准溶液的制备  取泰乐星标准品20mg，用50%乙腈定容至100ml。样品溶液的制备:取泰乐星样品20mg，用50%乙腈定容至100ml。

    3.2  标准曲线的制备及结果

    分别取泰乐星标准品4、8、16、20和24mg用50%乙腈定容至100ml，以4#相关物质浓度?峰面积进行回归，得到的回归方程为：

    y=28216x-2309.9  r=0.9959

    3.3  精密度

    对该方法的精密度进行测试，各相关物质峰保留时间及峰面积的rsd分别为0.65%和2.25%。

    3.4  专属性

    在样品溶液图谱(图1)中，主峰的保留时间(13.5min)与标准溶液图谱(13.3min)一致(标准溶液图谱略)，各峰的分离度均不小于1.5。

    3.5  定量限

    在上述色谱条件下，测得4#相关物质的定量限为0.356ppm，以泰乐星计为39.6ppm。

    3.6  样品测定

    测定结果见表1。

    a～d：泰乐星组分；  1#～4#：相关物质

    图1    样品溶液图谱    表1    样品测定结果(%，n=4)

    批  号测定结果1#2#3#4#rsd1#2#3#4#05121386?10.810.450.541.401.27.21.82.205121389?10.900.520.541.350.918.36.53.605121389?20.900.540.561.410.918.45.72.1

    4  讨论

    酒石酸泰乐星作为兽用抗生素，在英国兽药典［2］、欧洲药典［3］中均有收载，国外药典中还列出了酒石酸泰乐星中可能含有的杂质。建立泰乐星中相关物质的测定方法很有必要。

    为考察本方法测定相关物质的耐用性，尝试改变柱温和流速进行试验。结果显示柱温38℃时增加了一个杂质峰，原因可能是分离效果增强或样品对温度较敏感，升温使样品分解；柱温32℃无明显变化。流速1.2ml/min时显示所有出峰时间缩短，分离效果降低，2#、3#杂质峰消失；流速降至0.8ml/min所有出峰时间延长。提示用该法测定相关物质时柱温不宜超过35℃，流动相流速不宜超过1.0ml/min。

【参考文献】
  ［1］ 中国兽药典委员会. 中华人民共和国兽药典一部［s］. 2000：149.

［2］ british pharmacopoeia for veterinary use［s］. 2003:1274.

［3］ council of europe, european pharmacopoeia ［s］. 5.4:4039