链霉菌实验室培养基制备
2007-11-10 20:43:09   来源：本站原创   评论：0 点击：

LB（Luria-Bertani）培养基

胰蛋白胨 10g，

酵母抽提物 5g，

NaCl 5g，葡萄糖 1g，

蒸馏水加至 1000ml，

pH7.3左右（灭菌后第一次用时还要调一次）

LA

LB中加入终浓度为1.5-2%的琼脂粉(不同的琼脂加的量不同，如青岛琼脂大概需1.5%，而华美的需要2%)。

＊做蓝白斑筛选时不加葡萄糖

基本培养基（MM）

溶液：L-天冬酰胺 0.5g，

K₂HPO₄  0.5g,

MgSO₄·7H₂O  0.2g,

FeSO₄·7H₂O  0.01g,

蒸馏水至 1000ml

将每250ml溶液分装到装有2.5g琼脂的500ml三角瓶中，灭菌，使用时每瓶加入50％葡萄糖（8磅灭菌）5ml，调pH7.0。

配置MM的琼脂有lab agar、Ice agar(IA)

R5（1L）链霉菌原生质体转化时用

   蔗糖                                     103g

   K₂SO₄                                                    0.25g

   MgCl₂·6H₂O                             10.12g

   葡萄糖                                   10g

   Difco酪蛋白氨基酸                        0.1g

   微量元素溶液                             2ml

   Oxoid酵母提取物                          5g

   TES                                      5.73g

   加蒸馏水至                               1000ml

称取5.5g Difco琼脂放入500ml三角瓶中，倒入250ml上述溶液，然后塞上塞子后8磅灭菌（114度15分种）。使用时，将培养基融化，每瓶中加入：

   KH₂PO₄(0.5%)                              2.5ml

   CaCl₂·2H₂O(5M)                           1ml

   L-脯氨酸(20%)                             3.75ml

   NaOH(1M)调pH至7.3                     

对营养缺陷型菌株加入适当的营养因子（请参考《手册》）

YEME(酵母膏-麦芽膏培养基) 1L（液体培养链霉菌）

   Oxoid酵母提取物                           3g

   Oxoid蛋白胨Tryptone                        5g

   麦芽提取物（BD公司原Difco公司218630）    3g

   葡萄糖                                     10g

   蔗糖 ＊                                    340g

   蒸馏水                                   至1000ml

高压灭菌后加入：（8磅灭菌，113－114゜C，15min，自动灭菌锅一次不能灭过多东西，否则会灭不彻底。）

   MgCl₂·6H₂O(2.5M)                          2ml/L

制备原生质体时，还要加入：

   甘氨酸（20%）  ＊                          25ml/L

＊     蔗糖的主要作用是维持链霉菌生长时的渗透压。

＊     甘氨酸被认为能干扰链霉菌细胞壁的形成，使菌丝体片段更短，利于溶菌，有利于外源DNA的导入。

TSBY （1L）（液体培养链霉菌）

   Oxoid胰胨豆汤粉（TSB）                   30g

   蔗糖＊                                    340g

   Oxoid酵母抽提物                            5g

   蒸馏水                                    至1000ml

*不同菌株培养需要不同浓度的蔗糖，蔗糖的主要作用是维持链霉菌生长时的渗透压。

MS培养基

将黄豆饼粉加蒸馏水煮2到3小时，用纱布过滤得到滤液，将每250ml滤液分装到装有5g琼脂，5g 甘露醇的500ml三角瓶中，10磅灭菌，使用时调pH7.2-7.3。

2CMY培养基（用于井岗的接合转移）

可溶性淀粉                 10g    

胰蛋白胨                   2g

NaCl                       1g

(NH₄ )₂SO₄                           2g

K₂ HPO₄                    1g

CaCO₃                      2g

无机盐溶液*               1 ml

琼脂                      20g

蒸镏水                   1000 ml

PH7.2

无机盐溶液(每升)

FeSO₄ .7H₂ O    1g

MgCl.6 H₂ O    1g

ZnSO_4. 7H₂ O    1g

YMS培养基（阿维，井岗产孢）

酵母抽提物                 4g

可溶性淀粉                 4g

麦芽糖                    10g

CoCl. .6 H₂ O               5mg

琼脂                      20g

蒸镏水                   1000 ml

PH7.2

YD培养基

酵母抽提物               4g

麦芽糖                   10g

葡萄糖                   4g

MgCl                    2g

CaCl                    1.5g

琼脂                    15g

蒸镏水                  1000 ml

PH7.2