布拉氏酵母菌特性及培养条件的研究
2010-10-23 09:35:59 来源:1 广州博仕奥集团 2 华南农业大学 生命科学学院 评论:0 点击:
摘 要:本研究通过对布拉氏酵母菌生长特性及最佳培养基的一系列优化实验,结果表明:布拉氏酵母菌的菌体成近圆形状,且其生长范围相当广,在28~40℃均可生长;另在本研究中得到了布拉氏酵母菌的最佳液体培养条件:葡萄糖2%、硝酸钾0.5%、微量元素、pH自然、装液量100/500ml、接种量4%,在转速180r/min,温度34℃的条件培养24h,用比浊法检测OD660的吸光值可达1.2以上。
关键词:布拉氏酵母菌 培养条件 筛选
该布拉氏酵母菌(Saccharomyces boulardii)是在印尼荔枝中分离得到的,是酿酒酵母的亚种,已被广泛应用于人类抗击腹泻的药物中。其制剂应用于畜牧业,可有效降低病原菌和有关毒素的浓度,并能加强微生物平衡,刺激免疫系统,作为饲料添加剂的应用已得到包括中国、欧盟在内的世界许多国家的认可。最新研究表明,布拉氏酵母菌能抑制大肠杆菌内毒素的毒性,降低肠道内大肠杆菌数量。但是,作为微生态生物制剂,要想保证其生物疗效作用,必须在肠道内活菌数达到一定水平。因此,为了制备出高活性的菌剂,本实验对布拉氏酵母菌的发酵条件作了一系列的基础性研究,以期能将该类酵母菌更好的应用于畜牧行业。
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
比浊法、平板计数法。
草酸铵结晶紫染液:A液:结晶紫(crystal violet) 2g,95%酒精 20ml;
B液:草酸铵(ammonium oxalate)
混合A、B二液,静置48小时后使用。
2 结果与分析
2.1 菌种性质分析
利用沙氏琼脂培养基于
2.2 生长曲线测定
利用沙氏葡萄糖培养基培养,每2h取样1次,用无菌水稀释100倍,然后以未发酵的培养基作空白对照,在OD660nm波长下检测,以发酵时间为横坐标,吸光值为纵坐标做图,即可得到酵母菌的生长曲线。由图可以看出,布拉氏酵母菌在沙氏培养基中的生长曲线为0~6h为延迟期,6~12h为加速生长期,12~24h为对数生长期,24~34h为稳定期,34h后为衰退期;
2.3 装液量对布拉氏酵母菌的影响
用沙氏葡萄糖培养基,转速180rpm、pH自然条件下于32℃培养24h,然后取其发酵液用比浊法进行检测,由表1可知,装液量为100ml/500ml的效果相对来说较好一些,而且相对于50ml来说,生产量,工作效率都有提高,故后面的实验选择装液量为100ml/500ml。
2.4 pH值对布拉氏酵母菌的影响
用沙氏葡萄糖培养基,装液量为100ml/500ml,转速180rpm条件下于32℃培养24h,然后取其发酵液用比浊法进行检测,由表2可知,在一定范围内,pH值对它的影响并不太大,pH为5.5的时候效果稍好一点,而后面培养基中的pH也在5.5左右,故可选择不调节pH值。
2.5 布拉氏酵母菌在不同温度条件下生长情况
用沙氏葡萄糖培养基,在不同温度下培养24h,然后取样用比浊法进行检测,由图可知,从
用沙氏琼脂培养基,将布拉氏酵母菌分别于
2.6 接种量对布拉氏酵母菌的影响
用沙氏培养基,转速180rpm、pH自然,分别接种不同的母液,于32℃培养24h,然后取其发酵液用比浊法进行检测,由表3可知,接种量为4%、6%、8%时,相差不大,而2%的接种量,效果明显比4%要差,故选择4%的接种量。
2.6 碳源对布拉氏酵母菌的影响
用沙氏培养基作为基础培养基,分别用可溶性淀粉、蔗糖、乳糖和玉米淀粉代替葡萄糖,于34℃下培养24h,再用比浊法检测其OD660的吸光值,结果如下图,从图中,可以看到葡萄糖的效果明显好于其它一些碳源,其次为蔗糖和玉米淀粉,而乳糖的效果是最差的,故下一步实验中选择以葡萄糖做碳源。
用葡萄糖做碳源,转速180rpm、pH自然,分别加入不同浓度的葡萄糖,于32℃培养24h,然后取其发酵液用比浊法进行检测,结果如表4,可见,从2%以后,随着葡萄糖浓度的增加,其生长效果反而越差,故选择葡萄糖的浓度为2%。
2.7 氮源对布拉氏酵母菌的影响
用2%的葡萄糖做碳源,分别用氯化铵、硫酸铵、乙酸铵、硝酸钾、和尿素代替原来的蛋白胨,于34℃下培养24h,再用比浊法检测其OD660的吸光值,结果如下图,从图中,蛋白胨的效果最好,其次为硝酸钾,综合考虑,硝酸钾的成本比蛋白胨低许多,故选择以硝酸钾作为氮源。
用硝酸钾做氮源,转速180rpm、pH自然,分别加入不同浓度的硝酸钾,于32℃培养24h,然后取其发酵液用比浊法进行检测,结果如表5,可见,从0.5%以后,随着硝酸钾浓度的增加,其生长效果反而越差,故选择硝酸钾的浓度为0.5%。
3 结论
3.1 在本研究中发现布拉氏酵母菌的生长温度范围比较宽,但过高温度培养时会改变其菌体形态,不过此菌体形态在用较低温度培养仍可恢复。
3.2 在本研究中得到了布拉氏酵母菌的的最佳液体培养条件:葡萄糖2%、硝酸钾0.5%、微量元素、pH自然、装液量100/500ml、接种量4%,在转速180r/min,温度
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