工业微生物产生菌的分离筛选
2008-02-08 18:17:14   来源：本站原创   评论：0 点击：

（2）分离放线菌时，在样品中加入0.05%十二烷基磺酸钠（SDS）不仅可以抑制细菌的生长，还能激活放线菌孢子的萌发。加入氟哌酸（5mg/L）+制霉菌素（50mg/L）+青霉素（0.8mg/L）也可以有效地抑制细菌和真菌，而不影响放线菌的生长。

（3）分离霉菌和酵母菌时，在培养基中加入青霉素、链霉素和四环素各30U/ml，可以抑制细菌和放线菌生长。

（4）分离根霉和毛霉时，由于这些微生物的菌丝易蔓延成片，难以得到纯化的菌落，通常在培养基中添加0.1%去氧胆酸钠或山梨醇防止菌丝蔓延，使菌落长得小而紧密。

一般用于分离单一目的微生物的培养基中均含有抑制其他微生物的抑制剂，这些专用的抑制剂在小型实验室配制较麻烦，现已有成品供应，只要直接加入基础培养基即可。如氨苄西林，主要用于分离亲水气单孢菌。

4.控制培养温度

控制培养温度，也是一种获得目的微生物的有效措施。各类微生物生长温度不同，从大范围来看，可分三大类：一类是高温微生物，最适温度在50～60℃。如果要分离这类菌可将分离培养基置于50～60℃温度下培养，能抑制一些嗜冷、中性微生物生长，可以有效地分离到高温菌类。第二类是中温微生物，它们的最适生长温度是20～40℃，超过50℃，就停止生长。这类微生物最为常见，、数量都占首位。工业发酵微生物绝大多数都属于此类。其中不同类群微生物对温度又有所差别，一般细菌、放线菌最适温度为25～37℃，霉菌和酵母最适温度为20～28℃。第三类为低温微生物，它们的最适温度为15℃或更低。当从样品中分离各种菌类时，分别置于自身最适温度下培养也可大体上抑制另一些微生物的生长。当分离某些特殊产物的微生物时，对温度的选择还需考虑某些内在的关系，如在筛选不饱和脂肪酸产生菌时，由于细胞膜中所含的不饱和脂肪酸含量越高，其凝固点越低，即细胞在较低温度下仍能表现出活力，因此在低于正常温度10℃下分离效果最好。

三、厌气菌的分离

好气菌要在有氧条件下培养，嫌气菌要在厌氧状况下才能生长。工业发酵所用菌种为厌气菌的有丙酮丁醇的梭状芽孢杆菌，白酒增香用的丁酸菌、己酸菌及用于环境污水处理和水产养殖用的光合菌、反硝化菌、脱氮排硫杆菌等。它们生长于水底层及沉积物中，要从样品中分离这类菌，需采取厌气培养法，否则菌体因接触氧气而死亡。因此，培养过程中要除去氧气，现介绍如下几种方法：

（一）加还原剂

分离培养基内加入还原剂，如半胱氨酸、D型维生素C、硫化钠等，操作时以最快的速度划线分离，然后立即置于事先已抽真空密闭的容器内（充CO2或N2也可），于室温培养。

（二）焦性没食子酸法

焦性没食子酸和NaOH互相反应除去氧气。操作时，先将焦性没食子酸放在容器中，把含有厌氧菌样品的培养皿架空放入容器内，然后加入NaOH溶液，立即盖上盖子，并用石蜡或凡士林密封，放到室温下培养。要除去100ml空气中的氧气需要焦性没食子酸固体1g和10%NaOH溶液10ml。

（三）平皿厌气培养法

取无菌培养皿一套，在皿盖内  到上分离培养基，凝固后，皿底一侧放焦性没食子酸固体，另一侧放10%NaOH溶液，使二者不相接触。准备完毕，在凝固的琼脂平板上迅速把含厌氧菌样品进行划线，然后盖上皿盖并密封，摇动平皿使焦性没食子酸固体和NaOH溶液混合，发生化学反应，除去皿内的氧气，置适宜温度下进行培养。