黄原胶发酵实验报告
2006-09-17 16:56:52   来源：不详   评论：0 点击：

[摘要］本月的生物工程大实验是黄原胶摇床以及发酵罐实验。实验结果表明，黄原胶作为一种代谢产物，在约20h、对数生长期后期开始产生，且具体产量与溶氧相关度较大。在本次实验中，发酵罐的溶氧情况略好于摇床，在结果上直接反映为产胶量大以及菌体OD高。但是由于取样点时间间隔较远，不能够很好的反映出更具体的生长态势，在下一次实验中，将尽可能增加取样的次数。
1 实验材料与方法:
1.1 实验材料
1.1.1菌种:产黄原胶菌种，具体菌株名不详
1.1.2培养基：
⑴摇瓶实验培养基:
①斜面培养基（g/100mL）:
  葡萄糖2.0，酵母浸粉0.1,琼脂0.5，牛肉膏0.3，蛋白胨0.5，pH7.0 ,121℃ 20min灭菌。
②种子培养基：（g/100mL）:
  葡萄糖2.0， NaCl 0.3，蛋白胨0.3，KH2PO4 0.1, pH7.0 ,121℃ 20min灭菌。300mL三角瓶装50mL种子培养基。
③发酵培养基：（g/L）:
  葡萄糖50.0，蛋白胨6.0，K2HPO4  5.0，MgSO4  0.2，pH7.0 ,121℃ 20min灭菌。500mL三角瓶装100mL发酵培养基。
⑵发酵罐实验培养基：
①斜面培养基（g/100mL）:
  葡萄糖2.0，酵母浸粉0.1,琼脂0.5，牛肉膏0.3，蛋白胨0.5，pH7.0 ,121℃ 20min灭菌。
②种子培养基：（g/100mL）:
  葡萄糖2.0，酵母浸粉0.1,牛肉膏0.3，蛋白胨0.5，pH7.0 ,121℃ 20min灭菌。5000mL三角瓶装1000mL种子培养基。
③发酵培养基：（g/100mL）:
  葡萄糖3.0，酵母浸粉0.1，蛋白胨0.2，KH2PO4  0.3，K2SO4  0.1，Na2HPO4  0.1，MgSO4  0.1，pH7.0 ,121℃ 20min灭菌。
1.1.3培养条件：
⑴摇瓶实验
①接种斜面培养基，30℃恒温培养箱4－10小时活化菌种；
②接种种子培养基，30℃ 220rpm 24h；
③接种发酵培养基，30℃ 220rpm 72h。
⑵发酵罐实验
①接种斜面培养基，30℃恒温培养箱4－10小时活化菌种；
②接种种子培养基，30℃ 220rpm 24h；
③接种发酵培养基，30L发酵罐培养 48h。
1.1.4实验器材：
    试管，300mL三角瓶，500mL三角瓶，5000mL三角瓶，酒精灯，接种环，移液管，灭菌锅，培养箱，摇床，30L发酵罐及配套装置。
1．2 实验方法
    1.分光光度计620nm测菌体OD；
    2.粘度计3号转子20S读数测产胶粘度；
    3.DNS法作葡萄糖标准曲线测残糖；
    4.SBA测残糖；
    5.发酵液用乙醇粗制，80℃烘6h。

2  结果与讨论：
    1 摇床实验
          图一   葡萄糖标准曲线

      从摇床实验结果（表一）中可以看出，经过72小时的发酵，葡萄糖仍有10％左右的剩余，说明菌体还有继续发酵的空间，经过测2号瓶的产胶量，结果表明100mL发酵液产了1.01胶。

         表一  摇床实验结果

       注：4号瓶在实验过程中被晃倒。SBA法测定残糖为0.7％。
        此外，通过3号瓶和4号瓶对比可以看出，尽管两瓶的菌体生长情况、残余葡萄糖浓度大致相同，但是粘度相差的却很大，说明黄原胶的粘度高低取决于溶氧的好坏，因为黄原胶的粘度和产量也存在正比关系，因此，通过3、4号瓶的对比，我们可以得出结论：溶氧降低会抑制黄原胶产量。

   2 发酵罐实验

          表二  发酵罐实验结果