乳酸球菌培养条件的优化
2010-10-23 09:33:24   来源：广州博仕奥集团   评论：0 点击：

摘  要：本文通过检测乳酸菌在不同C源、N源、缓冲剂等成分的培养基中的菌落数以及不同温度、pH条件下的生长状况，筛选出乳酸菌生长的最佳培养基及培养条件。

1  基础条件

1.1  菌种  乳酸菌

1.2  器材  超净工作台，恒温培养箱，恒温摇床，光学显微镜，分光光度计等；500mL三角瓶，试管，培养皿，酒精灯，移液枪，接种环等。

1.3  试剂药品  玉米粉、淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、牛肉膏、豆粕粉、硫酸铵、尿素、蛋白胨、硝酸钾、酵母膏、CaCO₃、柠檬酸三钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、KH₂PO₄-Na₂HPO₄、乙酸钠、琼脂等。

1.4  基础培养基  葡萄糖1%，牛肉膏1%，酵母膏0.5% ，琼脂2%（固体），pH约6.0。

1.5  液体基本培养条件为：32℃，转速120rpm，培养20h-24h；

固体基本培养条件为：32℃，倒置培养24小时。

1.6  检测方法：分光光度计法，显微镜检测法结合平板活菌计数法检测。

2  优化方法

2.1  最适温度

平板培养观察：于不同的温度条件下培养，选择使乳酸菌生长速度达到最快的温度条件。

2.2  最适pH

用酸或碱调节基础培养基的pH于不同值，液体培养后检测，选择最优pH。

2.3  转速

调节不同转速培养，100 rpm、120 rpm、150 rpm、170 rpm、200 rpm，培养后检测。

2.4  最适C源

2.4.1 以1%的玉米粉、淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖分别作为C源，再加上1%牛肉膏，0.5%酵母膏，培养后检测。

2.4.2 选取一两种碳源后再做不同浓度的实验。

2.5  最适N源

可选N源分别为：1%牛肉膏、1%豆粕粉、1%硫酸铵、1%尿素、1%蛋白胨、1%硝酸钾；与上述方法相同选出最适N源及其浓度。

2.6  以添加酵母膏和不添加作比较，及其他一些生长因子，检测其对乳酸球菌生长的影响。

2.7  缓冲剂

分别添加缓冲剂：CaCO₃；柠檬酸三钠；磷酸氢二钾；磷酸二氢钾；KH₂PO₄-Na₂HPO₄；乙酸钠等。检测各种缓冲剂对乳酸球菌生长的影响。

2.8  优化培养基后，上罐发酵，检测活菌数。

3  结果与分析

该乳酸球菌在32℃～35℃温度下生长较好，最适pH为6.0～6.5；C源可选1%玉米粉，0.5%蔗糖，1%葡萄糖；N源可选3%豆粕，1%牛肉膏，1%蛋白胨。培养后活菌数达一百多亿每毫升。

4  讨论

乳酸菌为兼性厌氧菌，一般低氧量培养比较好，液体培养时转速稍慢些。在本实验中，选出的几种C源和N源还可以进一步做正交试验，同时参考试剂药品的价格，以选出最佳的配方。