滤膜法测定水中大肠菌群
2010-05-26 22:37:12 来源:不详 评论:0 点击:
一、目的要求
利用滤膜法测定水中大肠菌群。
二、基本原理
滤膜法是采用过滤器过滤水样,使其中的细菌截留在滤膜上,然后将滤膜放在适当的培养基上进行培养,大肠菌群可直接在膜上生长,从而可直接计数。所用滤膜是一种多孔硝化纤维膜或乙酸纤维膜,用水系过滤膜即可,其孔径约0.45μm。
三、试验原料及器材
实验原料:伊红美蓝琼脂平板或远藤氏琼脂平板,乳糖蛋白胨发酵管内有倒置小套管),灭菌水,河水或湖水;
器材:镊子;
夹钳;
烧杯
真空泵(天津市恒奥科技发展有限公司);
滤膜(天津市恒奥科技发展有限公司);
过滤器(天津市恒奥科技发展有限公司)等。
四、操作步骤
1.滤膜灭菌
将滤膜放入装有蒸馏水的烧杯中,加热煮沸15分钟,共煮沸三次,前两次煮沸后换水洗涤2—3次再煮,以洗去滤膜上残留的溶剂。
2.过滤器装置
用无菌手续将已灭菌的过滤器基座、滤膜、漏斗和抽滤瓶安装好,其中滤膜用灭菌镊子(浸在95%酒精内,用时通过火焰灭菌)移至过滤器的基座上。其他可直接用手或夹钳操作,但不要碰到伸入抽滤瓶的橡皮塞部分,以免染菌。
3.将抽滤瓶接上真空泵。
4.加水样过滤
直径50mm的滤膜,所过滤的水量以培养后长出的菌落数一般需要较多过滤器装置,多于50个为适宜,所以采用多联过滤器最好,可以减少误差。一般清洁的深井水或经处理过的河水与湖水等可取样 300—500 ml;对比较清洁的河水或湖水,可取样1-100ml;严重污染的水样可先进行稀释;未知的水样可做三个稀释度,选择菌落数合适的稀释度进行计算。本次实验于过滤器漏斗内加入比较清洁的河水或湖水100ml,加盖。
5.开动真空泵进行油滤。
6.抽完后,加入等量的灭菌水继续抽滤,目的是冲洗漏斗壁。
7.滤毕,关上真空泵,用灭菌镊子取滤膜边缘,将没有细菌的一面紧贴在远藤氏琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板上。滤膜与培养基之间不得有气泡。
8.将平板倒置于
9.挑取符合大肠菌群菌落特征的菌落,进行革兰氏染色、镜检。
10.将镜检为革兰氏阴性、无芽胞杆菌的菌落再接种一支乳糖蛋白胨发酵管,经
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