PriCells-原代肺泡上皮细胞的体外分离培养
2010-06-27 17:32:26 来源：不详评论：0 点击：

PriCells-原代肺泡上皮细胞（Primary Alveolar Epithelial Cells）的体外分离培养

1、完全无血液残留肺脏组织：

2、消化肺组织：

常用细胞消化酶：胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胶原酶。

经支气管将酶灌注到完整的肺中消化，或把肺组织剪碎放入消化液中消化。前者比后者更有效。

3、分离纯化细胞：

原代肺泡上皮细胞的分离纯化主要方法：

（1）密度梯度离心法：

密度梯度离心分离细胞的原理是不同细胞的沉降系数不同，在密度梯度离心中细胞所处的位置也相应不同。用ficoll或percoll不连续梯度离心法分离肺泡Ⅱ型上皮细胞。

（2）滤膜分离法：

肺泡Ⅱ型上皮细胞约10mm，比巨噬细胞(约25mm)和Ⅰ型细胞 (50mm-100mm)小，用150mm孔径的滤膜初滤除去大的组织碎片，30mm-40mm孔径的滤膜除去全部Ⅱ型细胞和部分巨噬细胞，采用 15mm的滤膜精滤。用滤膜分离操作简单，它和其他分离方法联合使用可以提高纯度。

（3）流式细胞技术法：

根据不同细胞之间的荧光差异，用荧光物质标记筛选。肺泡上皮细胞内含有丰富的脂类物质，用亲脂性荧光素标记，可以得到纯度很高的细胞。流式技术分离细胞的产量很低，但纯度极高。这种技术经过完善在将来会更有吸引力。

（4）免疫黏附法：

用IgG包被培养板，把肺泡上皮细胞悬液置于板上，巨噬细胞和其他大多数非肺泡上皮细胞因为含有Fc片段的受体而与IgG结合，吸附到板上，不黏附的肺泡上皮细胞被冲洗下来，简便易行，可除去绝大多数的巨噬细胞，有效的提高肺泡上皮细胞纯度。

（5）贴壁选择法：

贴壁选择原理：肺泡上皮细胞完成贴壁的时间不同，这种特性用肺泡上皮细胞培养时做筛选。

总之，根据肺泡上皮细胞培养最终目的，综合几种方法能达到预期效果。

例如：（1）先用滤膜过滤；（2）再用IgG包被法。

4、PriCells的产品

（1）原代肺泡上皮细胞， 5×10⁵ 细胞数/1ml

（2）原代细胞分离试剂盒

（3）原代细胞分离鉴定盒

（4）原代上皮细胞特制基础培养基

（5）原代上皮细胞培养特制添加剂

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