PriCells-磁珠法分离小鼠T细胞和B细胞
2010-06-27 17:32:22 来源:不详 评论:0 点击:
PriCells: 磁珠法分离小鼠T细胞和B细胞
基本方案
用AUTOMACS系统进行总T细胞、CD4+细胞或CD8+T细胞的自动分离
实验材料
1、小鼠
2、HBSS洗涤缓冲液
3、MACS缓冲液
4、磁珠
5、RPMI-10完全培养基
6、AUTOMACS系统和分选柱
7、30μm尼龙网或40μm预分离滤膜
实验方法
1、用5只小鼠的淋巴结或2只小鼠的脾脏制备单细胞悬液并去除红细胞。
2、细胞在10mlHBSS洗涤缓冲液中混悬后用血细胞计数器计数。
3、细胞悬液在4℃,200g离心10min。弃上清后将沉淀按每108个细胞0.9ml MACS缓冲液的比例混悬。每108个细胞加入0.1ml适当的磁珠后在4℃孵育15min。
4、在孵育的时间里,打开AUTOMACS系统电源。按产品说明书中操作规程运行清洁程序。
5、细胞悬液在4℃,200g离心10min。弃上清,在沉淀中加入足量的MACS缓冲液使细胞浓度达到108个细胞/ml,充分混悬。将细胞通过30μm尼龙网或40μm预分离滤膜。用0.1~0.4mlMACS缓冲液冲洗滤网。
6、细胞放到AUTOMACS的上样通道。选择possel程序,这样标记的细胞将从阳性通道洗脱。
7、细胞悬液在4℃,200g离心10min。弃上清后将沉淀用2~5ml RPMI-10完全培养基混悬。计数。
附录:
RPMI完全培养基:
RPMI1640培养基含有:
2%、5%、10%、15%或20%FBS,56℃热灭活1h
2μmmol/L L-谷氨酰胺
50μmol/ml 2-ME
100U/ml 青霉素
100μg/ml 硫酸链霉素
RPMI-10完全培养基:
配制RPMI完全培养基加入:
10%(V/V)FBS
1mmol/L 丙酮酸钠
50μg/ml庆大霉素
10mmol/L HEPES
4℃可保存2周
过滤除菌
HBSS洗涤缓冲液:
HBSS,含有:
5%(V/V)FBS
20mmol/L HEPES,pH7.0
100U/ml 青霉素
100μg/ml 链霉素
4℃可保存1个月
MACS缓冲液:
PBS,pH7.2
0.5%(m/V)BSA
2mmol/L EDTA
过滤除菌
用于自动MACS系统,室温储存1个月
用于LS或LD柱时,脱气,4℃保存
来源:武汉原生原代生物医药科技有限公司
联系电话:027-87490190/87490191
E-mail:pricellssales01@163.com
【点击可查看 武汉原生原代生物医药科技有限公司 相关产品】
联系电话:027-87490190/87490191
E-mail:pricellssales01@163.com
分享到:
收藏
评论排行
- ·中国发酵企业数据库(4)
- ·(4)
- ·CoQ10高产菌株选育的研究进展(2)
- ·抗生素发酵工艺所用冷却塔的性能分析及处理(1)
- ·微生物菌种选育技术.rar(1)
- ·发酵生产染菌及其防治(1)
- ·赤藓糖醇发酵工艺研究(1)
- ·重组AiiA 蛋白可溶性表达及发酵条件优化(1)
- ·生物反应器设计软件_发酵罐绿色版(1)
- ·酵母粉、酵母浸粉的区别(1)
- ·雷帕霉素研究进展(1)
- ·透明质酸用途和行业概况(1)
- ·黄酒制作工艺(1)
- ·水解(酸化)工艺与厌氧发酵的区别(1)
- ·糖蜜酒精废液处理过程中产生的微生物蛋...(1)
- ·紫杉醇高产菌发酵产物的分离、纯化和鉴定(1)