阿卡波糖发酵工艺的研究

阿卡波糖发酵工艺的研究
魏淑梅  洪军
【摘要】目的：探索阿卡波糖的发酵工艺，以提高阿卡波糖的发酵水平。方法：对阿卡波糖发酵培养基的考察，确定了阿卡波糖生物合成最佳的复
合氮源比例，同时考察了发酵培养基中速效碳源、速效氮源、磷酸盐对阿卡波糖生物合成的影响，确定了其抑制作用浓度和最适作用浓度。结果：确
定了最佳复合氮源比例组合为热榨黄豆饼粉／冷榨黄豆饼粉为1／2混合，得出葡萄糖最适浓度为2．5％ ，铵离子浓度为0．1％ ，磷酸盐浓度为0．2％ 。
【关键词】阿卡波糖；发酵工艺；发酵单位
【中图分类号】R944 【文献标识码】B
阿卡波糖是治疗Ⅱ型糖尿病的一线药物L1]。是从游放线菌(Acfi—
noplanes sp．SE50)的发酵液中提取而来，控制病人在进食含有淀粉的食
物后的血糖含量。对肠道内的一些消化酶都有强烈的抑制作用，有良好
的药动学性质和低毒性。
1 实验材料
1．1 菌种阿卡波糖产生菌：游动放线菌Actioplanessp．AC一17
1．2 培养基：种子培养基(s／100m1)：麦芽糖1．8、酵母粉0．5、热榨黄
豆饼粉2．5、甘油0．2、轻质碳酸钙0．2，常水配置，调pH6．5发酵培养基(g／
100m／)：高麦芽糖8、葡萄糖2、热榨黄豆饼粉2、玉米浆0．2、谷氨酸0．1、磷
酸二氢钾0．15、三氯化铁0．1、氯化钙0．3、碳酸钙0。4，常水配置，调plY／．0
2 摇瓶发酵条件
28℃摇床220r／min振摇培养28h后，3O℃摇床220r／min振摇培
养84h。
3 阿卡波糖发酵单位的测定
3．1 检测条件：岛津LC一10AT泵，SPD一10A紫外一可见光检测
器，C—R6A积分仪；正向色谱柱HypersilNH2(250mm X4．6mm，5um)；流
动相：乙腈一磷酸盐缓冲液(0．叭m0l／L，pH值7．0)(65：35)；流速1．0
ml／mln：检测波长210nm。
3．2 方法：将发酵液4000r／min离心30mln，取上清液1．0ml与0．5
Il1l蒸馏水和2．0ml乙腈混合后，11000r／rain离心lOmin，取上清液以微
孔滤膜过滤，取滤液20ul进样。精密称阿卡波糖标准品以二次蒸馏水配
制成200mg／L标准品溶液作对照。
3．3 效价的计算：A=(w 标×S样／s标)X样品稀释倍数，其中
A：样品中阿卡波糖的效价(ug／lIl1)W标：标准品的效价(ug／m1)S标：标
准品的峰面积S样：样品峰面积 J。
4 结果与讨论
4．1 复合有机氮源对发酵的影响：见表1。考察发酵培养基中的有
机氮源的组成。选取下列有机氮源物质组成不同的发酵培养基，看其对
发酵产量的影响。
表1 复合有机氮源对发酵的影响
培养基编号 氮源种类 效价(ug／m1)84h
【文章编号】1006—1959(2009)12—0247—01
得出7号发酵培养基，阿卡波糖发酵单位明显高于其它种类的复合
有机氮源。
4．2 速效碳源、速效氮源、磷酸盐对阿卡波糖生物合成的影响：分
别改变葡萄糖、硫酸铵、磷酸盐的用量，来考察其对发酵培养基的影响，
看其是否起抑制作用，确定其抑制最适作用浓度。
4．2．1 葡萄糖抑制浓度的考察：见表2。
表2 葡萄糖抑制浓度的考察